【甲基化检测样本前处理试剂盒操作流程】 

1)配制转化液：取 1 管装有亚硫酸盐干粉的试剂，瞬离，然后加 600 µL 无核酸酶水、 300 µL 稀释缓冲液、50 µL 溶解缓冲液，上下摇匀，置于 37 ℃ 1500 rpm 混匀 10 min；注： 每管中提供 10 次反应的剂量，该试剂为光敏试剂，尽可能减少曝光时间，应在制备好后立 即使用。如不能立即使用，可于 2-8 ℃保存一周，或-20±5 ℃保存一个月，使用前要预热到 37℃，并且涡旋混匀后使用。 

2)从冰箱中取出 DNA 样本置于冰上融化解冻，取一定总量样本，总体积 50µL，体积 不足 50 µL 的用无核酸酶水补足至 50 µL。 

3)取 100 µL 配制的完全溶解的转化液加入到装有 50 µL 样本的 0.2 mLPCR 管中，涡旋 混匀，瞬离； 

4)将上述混合液置于 PCR 仪中，进行如下反应：98℃ 10 min；64℃ 150 min ；4℃ HoLd。 

5)将吸附柱置于提供的收集管中，并将 600 μL 的结合液加入到吸附柱中； 

6)将 PCR 仪上反应结束的液体加入含有结合液的吸附柱中，盖好盖子后颠倒混匀 10 次。 

7)设置转速（>10000rpm）离心 1min，弃去液体。

8)向吸附柱中加入 700 µL 洗涤液，设置转速（>10000rpm）离心 1 min，弃废液； 

9)向吸附柱中加入 200 µL 去磺基液，在常温（10℃~30℃）下静置 15 min，设置转速 （>10000rpm）离心 1 min，弃废液； 

10)向吸附柱中加入 700 µL 洗涤液，设置转速（>10000rpm）离心 1 min，弃废液。 

11)再加入 700 µL 洗涤液，重复 10)步骤操作一次。 

12)设置转速（>10000rpm）空离 3 min，开盖晾干 2 min。 

13)将吸附柱放置到 1.5 mL 无核酸酶离心管中，将 25 µL DNA 溶解液加入柱中，静置 2 min（DNA 溶解液体积可根据实验需要调整，最少不低于 8 µL）。 

14)设置转速（>10000rpm）离心 1 min，洗脱 DNA。 15)洗脱的 DNA 可以立即使用，或者-20±5 ℃保存。长期储存建议保存在-70 ℃以下。